对照品含量标定方法需要至少两种经方法学验证的测定方法进行标定，并采用两种以上不同分离机理或经验证的不同色谱方法相互验证比较，同时采用二极管阵列检测器检测色谱峰纯度（如果无合适的另一种方法，就采用不同仪器分别进行测定），对测定结果统计分析确定对照品的纯度，色谱法确定纯度后扣除有关物质、炽灼残渣、水分和残留溶剂等后的理论含量确定为对照品的含量。

对于组份单一、纯度较高的药物，对照品标定方法宜首选可进行等当量换算、精密度高、操作简便快速的容量法。可根据药物分子中所具有的官能团及其化学性质，选用不同的容量分析方法，但应符合如下条件：

1.反应按一个方向进行完全；

2.反应迅速，必要时可通过加热或加入催化剂等方法提高反应速度；

3.共存物不得干扰主药反应，或能用适当方法消除；

4.确定等当点的方法要简单、灵敏；

5.标化滴定液所用基准物质易得，并符合纯度高、组成恒定且与化学式符合、性质稳定（标定时不发生副反应）等要求。

1. 对照品含量要求：（精制后的原料药，必须高于原料纯度）

1.1主成分对照品含量要求：含量一般不低于99.5%（折干后）。  

1.2杂质对照品含量要求：含量一般不低于95.0%（折干后）。

2. 高效液相色谱法测定纯度时要求  

2.1供试品浓度要求：分析方法有关物质项下浓度。 

2.2检测波长选择：首选有关物质项下条件，同时结合DAD/PDA结果查看多个波长项下(可分别选各个杂质最大吸收波长)结果，以平均值计算结果（杂质对照品小于5%以内，主成分对照品小于1%以内）。  

2.3流动相选择：首选有关物质项下条件，如果出峰时间过短（小于5min）可适当调整色谱条件，以延长其保留时间考查。  

3. 对照品标定方法  

3.1纯度的测定

3.1.1高效液相色谱法纯度的测定

在两台不同仪器上分别进行测定，6样6针，采用面积归一化法，计算主成分峰面积百分比，以二者平均值计算纯度。 

3.1.2薄层色谱法纯度的测定

使用TLC法时，使用3种不同展开剂对对照品进行鉴别，并且至少在一种条件下的斑点足够大到稍有拖尾，如果3次都只得到一个斑点，说明其基本为纯物质。

3.1.3 差示扫描量热法

DSC法是一种简便、快速、可靠且试样用量少的方法，尤其适合杂质对照品纯度的测定。《美国药典》从 16 版开始至今一直将DSC法用于对照品的纯度检查。

3.2滴定法含量的测定

照电位滴定法（中国药典2015版 四部 通则0701），滴定6份供试品进行测定，并将滴定的结果用空白试验校正，计算滴定度（采用四位有效数字）。  

注意事项：

①供试品的取用量应满足滴定精度的要求；

②滴定终点的判断要明确，提供滴定曲线。如选用指示剂法，应考虑其变色敏锐，并用电位法校准其终点颜色；

③要给出滴定度（采用四位有效数字）的推导过程。

3.3其他检测项检测

3.3.1残留溶剂测定 

取本品，照残留溶剂测定法进行测定（中国药典2015版 四部 通则0861），采用外标法进行测定时，配制6个样品，或采用两种不同的内标物按内标法测定，取残留溶剂量的平均值进行计算。

3.3.2水分测定  

取本品，照水分测定法（中国药典2015版 四部 通则0832）进行测定，供试品 6 份进行测定，根据水分含量平均值进行计算。

3.3.3干燥失重测定

取本品，供试品2份，照干燥失重测定法（中国药典2015版 四部 通则0831）干燥至恒重，计算干燥失重平均结果。

3.3.4炽灼残渣   

取本品，供试品2份，照炽灼残渣测定法（中国药典2015版 四部 通则0841）测定，根据供试品测定平均值计算结果。

3.4计算公式

3.4.1湿品含量=色谱纯度*（1-残留溶剂%-水分%-残渣%）或

湿品含量=色谱纯度*（1-干燥失重%-残渣%）

3.4.2含量=湿品含量/（1-干燥失重%）*100%。（限度应为 99.0~101.0%）

 注：自制的杂质对照品建议直接采用减压干燥（稳定的话）至恒重后的样品标定，含量=色谱纯度*（1-残渣%），采用合适包装密封，贴上标签标明品名、批号、标定含量、数量、标定日期、有效期，这样使用时可直接使用，无需再折算。

4. 申报时需要形成的文件   

4.1验证报告包括：

4.1.1总体情况说明：包括对照品理化性质、合成或生产工艺路线及纯化方法、贮藏和制备量等情况；

4.1.2结构确证：包括质谱（MS）、核磁（NMR）、紫外（UV）、熔点、元素分析或高分辨、薄层（TLC）或高效液相（HPLC）、差示扫描量热法（DSC）、 X粉末衍射、红外（IR）等；

4.1.3标定所用方法：不同含量测定方法测定、水分测定、残留溶剂测定（或干燥失重测定）、灼炽残渣测定等；

4.1.4提供分析报告（COA）。

4.2提供对照品质量标准

原创：药事纵横